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大型質粒抽提試劑盒的提取與哪些因素有關
發布日期：
2019-03-15
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大型質粒抽提試劑盒用堿裂解法從培養菌中提取質粒DNA，采用*的溶液配方和內毒素清除試劑，只需要幾次簡單離心去除蛋白質、多糖、內毒素、RNA等雜質，獲得高質量的質粒DNA。純化DNA的OD260/280通常在1.8左右，得到的質粒可直接應用于細胞轉染甚至動物體內實驗等對DNA純度要求很高的工作中。
1.提取的質粒量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb 的大質粒，應加大菌體使用量，同時按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。
2.提取大質粒時操作動作要輕柔，應該使用剪大了開口的吸頭，防止機械剪切對DNA的損壞。
3.DNA沉淀液沉淀離心后，可能看不到明顯沉淀。如未見沉淀，擔心DNA丟失，可保留上清液，待完成全部操作后電泳鑒定，以確定是否獲得終產物（數百微克DNA離心沉淀在管的側壁上，可能無法看到明顯團塊）。
4.得到的質粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260值為1相當于大約50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶，也可能為2條或者多條DNA條帶，這主要是不同程度的超螺旋構象質粒泳動位置不一造成，與提取物培養時間長短、提取時操作劇烈程度等有關。本公司產品正常操作情況下基本超螺旋可以超過95%。
5.質粒DNA確切分子大小， 必須酶切線性化后，對比DNA分子量Marker才可以知道。處于環狀或者超螺旋狀態的質粒，泳動位置不確定，無法通過電泳知道確切大小。
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